TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit

Description

Apoptosis là một hiện tượng sinh học cơ bản của tế bào. Nó đóng một vai trò quan trọng trong quá trình tiến hóa, cân bằng nội môi và phát triển hệ thống của sinh vật. Một số thay đổi về hình thái, sinh lý hoặc sinh hóa sẽ xảy ra trong quá trình apoptosis của tế bào như co rút tế bào, mất liên lạc giữa các tế bào lân cận, mất điện thế màng ty thể, tính thấm bất thường của màng, ngưng tụ chất nhiễm sắc, phân mảnh nhân, thoái hóa DNA; hình thành các lồi màng; phosphatidylserine quay ra khỏi màng trong khi cấu trúc của màng tế bào đã hoàn thiện. Cuối cùng, tế bào bị vỡ thành nhiều túi gọi là thể apoptotic, sẽ trải qua quá trình thực bào. Những thay đổi hình thái được mô tả ở trên xảy ra ở các giai đoạn khác nhau của quá trình apoptosis.

Một bước ngoặt của quá trình apoptosis là sự suy thoái DNA của nhiễm sắc thể. Sự suy thoái thường xuyên và cụ thể này tạo ra các đoạn DNA có độ dài khác nhau của bội số nguyên từ 180 bp đến 200 bp. Đây chính xác là chiều dài của sợi DNA bao bọc histone. Nó cho thấy rằng DNA của nhiễm sắc thể bị phân cắt ở phần tiếp giáp giữa các nucleosom, tạo ra các đoạn oligonuclear có độ dài khác nhau. Các thí nghiệm đã chỉ ra rằng sự phân hủy có quy định của DNA là kết quả của một endonuclease nội sinh, phân cắt DNA của nhiễm sắc thể tại điểm nối của các nucleosom. Điện di trên gel agarose cho thấy một mô hình bậc thang cụ thể trong các tế bào apoptotic nhưng một mô hình liên tục lan tỏa trong các tế bào chết.

Nguyên tắc phát hiện

Bộ tài liệu này dựa trên phương pháp TUNEL (TdT qua trung gian dUTP Nick End Labeling). TdT (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) được sử dụng để xúc tác sự kết hợp FITC-12-dUTP tại đầu cuối 3′-OH của DNA bị đứt gãy trong tế bào apoptotic. DNA được đánh dấu FITC-12-dUTP có thể được quan sát trực tiếp bằng kính hiển vi huỳnh quang hoặc định lượng bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy. Bộ dụng cụ này được tối ưu hóa cho phản ứng dán nhãn. Nó sử dụng tỷ lệ tốt nhất của chất đánh dấu huỳnh quang và dNTP không được gắn nhãn để kết hợp các nucleotide đầu tận cùng 3′-OH để các đầu của cùng một đoạn DNA bị phân mảnh có thể tạo thành “đuôi đánh dấu” dài hơn. “Đuôi đánh dấu” làm giảm sự cản trở cơ bản của các nhóm ghi nhãn được kết hợp với dNTPs. Nó làm tăng số lượng fluorophores trên mỗi mảnh và giảm khả năng tập hợp và dập tắt các fluorophores lân cận.